bradford法定量蛋白质,一种测定蛋白质含量的方法——布拉德福定量法

1. 什么是Bradford法定量蛋白质

Bradford法定量蛋白质是一种测定蛋白质含量的方法，是以Bradford染料与蛋白质结合形成复合物使溶液颜色变化为基础的。该方法比Lowry法和Biuret法定量更为简单、快捷、准确。

相对于其它的定量蛋白质方法，Bradford法的优点如下：

1) Bradford法快速。样品加入试剂后，只需要10分钟左右等待样品反应即可得到相对准确的定量结果，一次实验处理少于60个样品。

2) Bradford法精准。其灵敏度可达到0.1ug/ml，能够定量蛋白含量高达1mg/ml。

3) Bradford法适用范围广。能够适合不同种类的蛋白质，适合含有一定浓度的离子和界面活性剂的样品。

4) Bradford法试剂简单。布拉德福染料是从天竺葵属植物中提取的天然色素，极易制备且稳定。

1) 制备标准曲线。选取适当重量的标准蛋白，根据其理论质量算出每个样品的浓度。（常用的标准蛋白有BSA、实验室生产的蛋白标准品等）

2) 加入含有Bradford染料的试剂（Bradford试剂），使试剂吸附于蛋白质上。

3) 等待颜色稳定后，在波长为595nm处测量各标准蛋白和待检测样品的吸光度。

4) 根据标准曲线计算待检测样品中的蛋白含量。

Bradford法作为一种常用的定量蛋白质的方法，其存在如下问题：

1) 部分样品会导致Bradford染料定量的不准确。

2) 由于蛋白质与Bradford试剂结合，且Bradford染料的pH值对试剂稳定性有一定影响，故对容易被胶囊包裹的疏水蛋白质定量不够准确。

3) 对于含有大量干扰物的样品定量也不够准确，需要通过去除干扰物的方法来提高定量的准确性。

总之，Bradford法作为一种测定蛋白质的重要方法，被广泛地应用于生物、药学及金融等领域中。在实验操作过程中，根据菜单的提示，正确使用Bradford试剂、标准曲线的制备和测量等方法，可以使Bradford法得到更好的使用效果。