1. 简介
Bradford试剂，也称为布拉德福试剂，是一种通用的检测蛋白质的试剂。该方法是由John R. Bradford于1976年开发的，其基本原理是由于蛋白质与染料结合后，染料分子的吸收光谱会发生变化。这种变化可以在可见光范围内观察到，并用于测定蛋白质的浓度。Bradford试剂是一种简单、快速和可靠的测定蛋白质浓度的方法。
2. 原理
Bradford试剂的核心部分是一种染料分子——联苯胺蓝，它在碱性条件下会变成蓝色。当联苯胺蓝遇到蛋白质时，蛋白质的极性基团会与联苯胺蓝发生疏水相互作用，从而使联苯胺蓝变成一种离子对染料。离子对染料的吸收光谱比原来的染料更强，而且吸收峰也会发生移动。蛋白质的量越多，离子对染料的数量就越多，吸收光谱就会随之增强。因此，可以通过测量样品的吸收光谱，来确定样品中蛋白质的浓度。
3. 操作步骤
Bradford试剂的使用非常简单，以下是一些常规操作步骤：
1. 准备样品：将待测样品制备成相同的量和体积。将每个样品分别加入到标有编号的离心管中。
2. 加入Bradford试剂：将每个离心管中的样品加入Bradford试剂，然后混匀。可以使用直接加样法或逆浸渍法。直接加样法是将Bradford试剂直接加入样品中，逆浸渍法是将样品加入Bradford试剂中。无论哪种方法，加入后都需要用涡流器混匀。
3. 记录吸光度：将样品和Bradford试剂混匀后，静置5分钟。然后，使用分光光度计在595nm处记录每个样品的吸光度。不同样品的吸光度值之间应该要有一定的差异。然后，可以使用标准曲线或蛋白质标准溶液来计算样品中蛋白质浓度。如果需要缩短反应时间或改善灵敏度，可以在Bradford试剂中加入5％三氯乙酸（TCA）或3％磺酸（SDS）。
4. 应用
Bradford试剂是一种非常有用的检测蛋白质浓度的工具，已广泛应用于生物化学和分子生物学领域。它可以用于测定各种类型的蛋白质，包括溶菌酶、酯酶、乳酸脱氢酶、球蛋白和胶原蛋白等。广泛应用于分离和分析蛋白质的许多技术，如SDS-PAGE、凝胶过滤色谱和离子交换色谱等。使用该方法，可以快速、准确地测定样品中蛋白质的浓度。同时，由于它的简洁、灵敏和快速的特点，Bradford试剂也被广泛应用于高通量的蛋白质组学研究中。
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