1. 引言
蛋白质是生物体重要的组织结构、功能分子、调控分子等，因此在生物学、医药学、食品科学等领域中的研究有着广泛的应用。测定蛋白质浓度是分离纯化、鉴定、定量等蛋白质研究的基础之一。目前，市面上有多种测定蛋白质浓度的方法，其中Bradford法是一种简单、快速、准确的蛋白质浓度测定方法。本文将总结Bradford法的原理、步骤、应用和注意事项。
2. Bradford法原理
Bradford法原理是利用Coomassie蓝G-250染色剂与蛋白质结合后的颜色变化，从而确定蛋白质浓度。Coomassie蓝G-250染色剂在蛋白质存在下从蓝色变为蓝紫色，且吸收波长由465nm移到595nm，形成分子内交联产生的吸收峰。吸收峰与蛋白质质量浓度成正比关系，可以利用已知蛋白质浓度的标准品与待测样品在吸收波长下的差值确定待测样品中的蛋白质浓度。
3. Bradford法步骤
1) 制备标准曲线：将不同浓度的标准蛋白质与Bradford试剂按一定比例混合，反应一段时间后，在595nm波长下测量吸光度，并绘制标准曲线。
2) 用Bradford试剂处理待测样品：将待测样品加入适量Bradford试剂，混合均匀。在室温下反应10min之后，在595nm波长下测量吸光度。
3) 利用标准曲线确定蛋白质浓度：将待测样品的吸光度值代入标准曲线方程求出蛋白质浓度。
4. Bradford法应用和注意事项
Bradford法适用于测定0.2mg/mL以上的蛋白质浓度，范围广，响应灵敏。常用于分析和纯化蛋白质，也可应用于食品中蛋白质含量分析。但需要注意：
1) Bradford试剂必须新鲜，避免暴露在光线下。存放时间过长或反复使用会影响测定结果。
2) 待测样品中有较强的碱性组分（如胆碱、尿等），会影响测定结果。应选用其他蛋白质浓度测定方法来判定蛋白质浓度。
3) 蛋白质取样的质量也会影响测定结果，应根据测定目的和样品特点选择不同的取样方法和样品处理方式。
5. 结论
总体来说，Bradford法是一种具有准确性、选择性和快速性的蛋白质浓度测定方法。在实际应用中，需要根据样品特性选择不同的取样方法和样品处理方式，同时注意试剂的新鲜度和样品的干扰因素。对于应用范围广泛的生物学、医药学、食品科学等领域，在蛋白质含量测定方面，Bradford法是一种较好的选择。
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