bradford法测蛋白浓度实验报告,测定蛋白浓度的Bradford方法实验研究

1. 实验目的

本实验旨在了解Bradford法测定蛋白浓度的原理及其操作方法，掌握分光光度计的使用技巧，进一步学习和理解生物大分子测定技术的应用。同时，通过实验检测不同样品中的蛋白质浓度并分析结果，从而为生物大分子研究提供可靠的数据支持。

Bradford法是利用共振能量转移原理测定蛋白质浓度的方法。在一定pH值下，蛋白质与考马奇亚明酸（Coomassie Brilliant Blue G-250）发生复合反应，使得吸收峰从465nm向595nm移动，从而实现测定蛋白质浓度的目的。

1）制备样品：将不同浓度的蛋白质标准样品或待测样品分别加入生理盐水溶液中，并用0.45μm的滤膜过滤，得到均质的蛋白质溶液。

2）制备Bradford试剂：将Bradford试剂溶解于生理盐水中，摇匀，得到工作液。需要注意的是，Bradford试剂需在制备后 2 小时内使用，否则准确性会受到影响。

3）选取分光光度计：打开分光光度计，调节至595nm处，并载入样品。使用空白生理盐水进行基准校准。

4）测定样品吸收值：依次将样品加入移液管中，将移液管插入样品槽中，读取吸收值，并计算蛋白质浓度。在操作过程中，需避免空气接触、震荡等因素造成测量误差。

我们选取了五个不同浓度的蛋白标准样品进行实验测量，结果如下：

样品编号

浓度

吸收值

0 mg/mL

0.000

0.5 mg/mL

0.122

1 mg/mL

0.261

2 mg/mL

0.502

5 mg/mL

1.144

根据标准样品的吸收值和已知浓度，我们可以建立吸光度和浓度的标准曲线，并据此推算待测样品的浓度。通过实验得出的结论是，Bradford法测蛋白质的准确度与重复性均较高，是一种应用广泛、简便易行的测定方法。